调节性T细胞（T-Reg细胞）的实验流程

调节性T细胞（T-Reg细胞）是一种特殊的T细胞系，对控制自身耐受和炎症反应至关重要。调节性T细胞对于调节免疫稳态和抑制不同疾病环境中的免疫反应具有至关重要的作用，它能通过抑制CD4 辅助性T细胞和CD8 细胞毒性T细胞的激活和分化，对自体和肿瘤表达的抗原产生反应性。Treg细胞表达特异性转录因子Foxp3，因而，CD4 CD25 Foxp3 被认为是Treg细胞的经典标记组合。
但是问题来了，选什么亚型，选什么来源，选什么荧光？
说到这儿，想必大家都很想知道，CD4 CD25 FOXP3 Treg调节性T细胞检测试剂盒（TregFlowEx Kit）#ED7417能否解决这一难题呢？

CD4 CD25 FOXP3 Treg调节性T细胞检测试剂盒反应种属：人；应用类型：流式细胞术，FC；原理： 用于流式细胞术检测人外周血或脐带血中的调节性T细胞Treg (CD4 CD25 FOXP3 )的百分比。
CD4 CD25 FOXP3 Treg调节性T细胞检测试剂盒组分：固定与裂解液、破膜剂、封闭缓冲液、CD4-FITC/CD25-PE抗体预混液，以及FOXP3-APC抗体。
实验流程如下：
1.表面染色：
1.1在试管中添加10l CD4 FITC/CD25 PE试剂。
1.2添加100l人血。
1.3混合均匀，在冰箱（28℃）的黑暗中孵育10分钟。
1.4（可选清洗）洗涤池，加入2mL冷PBS，在300 g下离心5分钟，4℃。
1.5吸入上清液，立即进入细胞内染色。
2.细胞内染色
2.1加入1mL稀释的冷固定和溶解液。
2.2混合并在冰箱（28℃）黑暗中孵育10分钟。
2.3添加0.5mL渗透溶液。
2.4混合并在冰箱（28℃）黑暗中孵育10分钟。
2.5在400 g条件下，4℃下将细胞离心5分钟。（离心前，请勿在固定/烫发混合物中添加任何其他缓冲液）
2.6去除（脱蜡）上清液。
2.7添加50L冷阻缓冲液。
2.8添加50L冷PBS。
2.9混合并在冰箱（28℃）的黑暗中孵育5分钟。
2.10加入5μl FoxP3 APC试剂。
2.11混合并在冰箱（28℃）的黑暗中孵育30分钟。
2.12. 用2ml冷PBS冲洗细胞两次，在400 g下离心5分钟，4℃。吸入/脱出上清液。
2.13. 在PBS中加入300l 1%甲醛，并将染色样品存放在28℃下，直到流式细胞仪测定。4小时内分析处理样品。
结果展示：
使用TregFlowEx试剂盒中对人CD4阳性淋巴细胞进行流式细胞术多色染色。 Treg细胞（CD4 CD25 FOXP3 ）位于右上象限。

文章来源：每日生物评论
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